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酸奶中乳酸菌的測(cè)定實(shí)驗(yàn)

更新時(shí)間:2014-03-19      點(diǎn)擊次數(shù):6730

活性酸奶需要控制各種乳酸菌的比例,乳酸菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)有復(fù)雜的要求,生長(zhǎng)需要碳水化合物、氨基酸、肽類、脂肪酸、酯類、核酸衍生物、維生素和礦物質(zhì)等。測(cè)定乳酸菌時(shí)必須盡量將試樣中所有活的乳酸菌檢測(cè)出來(lái),采用稀釋平板菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)酸奶中的各種乳酸菌可獲得滿意的結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)宗旨是了解酸乳中乳酸菌分離原理及掌握酸乳中乳酸菌菌數(shù)的檢測(cè)方法。

實(shí)驗(yàn)方法原理活性酸奶需要控制各種乳酸菌的比例,有些國(guó)家將乳酸菌的活菌數(shù)含量作為區(qū)分產(chǎn)品品種和質(zhì)量的依據(jù)。由于乳酸菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)有復(fù)雜的要求,生長(zhǎng)需要碳水化合物、氨基酸、肽類、脂肪酸、酯類、核酸衍生物、維生素和礦物質(zhì)等,一般的肉湯培養(yǎng)基難以滿足其要求。測(cè)定乳酸菌時(shí)必須盡量將試樣中所有活的乳酸菌檢測(cè)出來(lái)。要提高檢出率,關(guān)鍵是選用特定良好的培養(yǎng)基。采用稀釋平板菌落計(jì)數(shù)法,檢測(cè)酸奶中的各種乳酸菌可獲得滿意的結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)步驟

一、樣品稀釋


先將酸奶樣品攪拌均勻,用無(wú)菌移液管吸取樣品25 ml加入盛有225 ml無(wú)菌水的三角瓶中,在旋渦均勻器上充分振搖,務(wù)必使樣品均勻分散,即為10:1的樣品稀釋液,然后根據(jù)對(duì)樣品含菌量的估計(jì),將樣品稀釋至適當(dāng)?shù)南♂尪取?/p>


二、制平板


選用2~3個(gè)適合的稀釋度,培養(yǎng)皿貼上相應(yīng)的標(biāo)簽,分別吸取不同稀釋度的稀釋液1 ml置于平皿內(nèi),每個(gè)稀釋度作2個(gè)重復(fù)。然后用溶化冷卻至46 ℃左右的MRS或改良CHALMERS培養(yǎng)基倒平皿,迅速轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使之混合均勻,冷卻成平板。


三、培養(yǎng)和計(jì)數(shù)


將平皿倒置于40 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24~48 h,觀察長(zhǎng)出的細(xì)小菌落,計(jì)菌落數(shù)目,按常規(guī)方法選擇30~300個(gè)菌落平皿進(jìn)行計(jì)算。

注意事項(xiàng)

1.  指示劑顯色

由于產(chǎn)酸菌落周?chē)苁笴aCO3產(chǎn)生溶解圈,酸堿指示劑應(yīng)呈酸性顯色反應(yīng)。

2.  鏡檢形態(tài)

必要時(shí),可挑取不同形態(tài)菌落制片鏡檢確定是乳桿菌或乳鏈球菌。保加利亞乳桿菌呈桿狀,成單桿、或雙桿菌或長(zhǎng)絲狀。嗜熱鏈球菌,呈球狀,成對(duì)、或短鏈、或長(zhǎng)鏈狀。

3.  參照比較

據(jù)介紹,改良CHALMERS培養(yǎng)基的檢出率較MRS培養(yǎng)基高,M17培養(yǎng)基較適合于乳球菌的培養(yǎng),在檢測(cè)時(shí)可同時(shí)使用多個(gè)培養(yǎng)基作比較。

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